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合成肽在长度上有何限制?
我公司合成的多肽长度为6~50个氨基酸。标准的固相合成程序一般能合成6~50个氨基酸的多肽。
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如何解释MALDI(MS)中的P+Na 和P+K峰?
经常会在MALDI中看到Na峰和K峰,钠和钾来源于溶剂水。即便是蒸馏水和去离子水也会含有痕量的钠离子和钾离子,无法完全除去。它们在进行质谱分析时也会离子化并与肽的自由羧基结合。因为没有纯化水的系统将水中的钠离子和钾离子除去,所以有时候在MALDI MS图谱中出现钠峰和钾峰也是再所难免的。
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请介绍一下你们的纯化策略
我公司合成的多肽是用制备型反相HPLC进行纯化的,所用的两种流动相中都添加了TFA,pH 2。A相是0.1% TFA于超纯水中,B相是0.1% TFA 于ACN 中,pH 2。样品可以直接用A相溶,或者先用少量B相溶解再用A相稀释。有时可能需要用强溶剂如甲酸、乙酸来溶解疏水肽,具体采用哪种方法要看肽序列。在pH 6.8 时一般很难将肽溶解也很难进行纯化,因此我们一般是先将肽溶解再用两种流动相进行梯度洗脱。所用的pH 6.8的缓冲液为10 mM醋酸铵于超纯水中(流动相A),纯ACN(流动相B)。通过紫外检测器在214 nm处检测,收集不同组分并用MADLI-TOF MS进行成分鉴定,用反相 HPLC分析纯度,然后把目的肽冻干,将冻干的肽合并装入小瓶中,最后,再对合并后的产物进行MS和HPLC分析。
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贵公司对本公司的产品是如何监控的?
所有合成肽都经过HPLC和MS分析,除MALDIMS 外,由于肽在不同的质谱仪中,能按其本身的序列进行离子化,我们可以运用HPLC-MS技术对HPLC中那些离子化的峰进行分析。我公司的技术装备[MALDI-MS,HPLC-(ESI)MS(离子阱和四极管阵列)]为分析提供可靠的保证。
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多肽的溶解性和多肽的质量有关系吗?
合成的多肽溶解性不好,多肽就有问题对吗?
答:很难准确预测一个多肽的溶解性及合适的溶剂是什么。如果多肽难以溶解就认为多肽合成有问题这个观念并不正确。
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如何在溶液中保存多肽?
如果一定要将多肽保存在液体中,请使用消过毒的缓冲液,在PH值5-6,在-20℃储存,以延长多肽在溶液中的寿命。
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在溶液中多肽能保存多长时间?
最好不要将剩余多肽保存在溶液中。溶液中多肽的保质期是非常有限的,特别是序列中有半胱氨酸、蛋氨酸、色氨酸、天冬酰胺酸、谷氨酸、N-末列的谷氨酸。一般来说,取出必要的使用数量,剩余部分再冻干长期保存。